RSR / Acetylcholine receptor autoantibody kit
작성자 관리자
날짜 2021-10-15 13:14:23
- 사용목적
혈청 중 아세칠콜린 수용체 항체의 정량검출을 위한 방사면역측정
- 작용원리
성인 및 태아의 아세틸콜린 수용체의 형태는 소단위(subunit)에 따라 다르다. (태아 수용체의 감마 소단위는 성인 수용체에 있는 엡실론 소단위(epsilon subunit)로 대체된다.)
일부 혈청의 AChRAb(acetylcholine receptor autoantibody)는 우선적으로 태아형태의 수용체를 인식하지만, 일부 다른 혈청의 AChRAb는 성인형태의 수용체를 우선적으로 인식한다. 결과적으로, 세정 용해된 태아와 성인 수용체 형태의 균형적 혼합물은 AChRAb 시험을 위한 최적의 준비다. 125I 표지 알파 분가로톡신(bungarotoxin)으로 표지된 이 수용체 혼합물은 RSR의 AChRAb 시험키트의 기반을 제공한다.
트레이서(표지자) 수용체(125I-AChR) 시험에서 검체 혈청과 표지된 수용체, 항 휴먼 IgG(Anti Human IgG)와 면역침전된 수용체 항체 혼합 결과물과 함께 반응시킨다. 원심분리와 세척 단계, 침전 후, 혼합된 항체 복합체는 감마측정기로 계측하며, %결합율을 결정한다.
결합율의 방사능 수치는 검체 내의 AChRAb 양에 비례한다.
- 사용방법
1. 순수한 혈청(5μL) 또는 10배 희석된 혈청, (50μL)을 3.5mL 플라스틱튜브에 가한다. (duplicat으로) 항상 정상혈청과 양성 콘트롤을 매회 포함시킨다.
2. 표지된 아세칠콜린 수용체 50μL를 가하고, 볼텍스 믹서에서 잘 섞고 실온에서 2시간 인큐베이트한다.
3. 안티-휴먼 IgG 50μL를 가하고, 잘 혼화하고 2-8℃에서 두 시간 인큐베이트한다. 편하다면, 2-8℃에서 하룻밤 정도 인큐베이션 할 수 있다.
4. (이 항목은 옵션이다.) 균질한 현탁액이 얻어질 때까지 볼텍스 믹서에서 침전유도액을 혼화하는 데 이때 튜브 당 25μL를 가한다. (침전유도액 사용시 밑이 라운드한 튜브가 좋다.)
5. 세척액 1mL룰 가하고, 2-8℃에서 20분간 3000 x g 에서 원심분리한다.
6. 튜브를 아스피레이션 혹은 기울여서 준다. 이 때 펠렛이 손상되지 않도록 한다.
7. 각 튜브에 세척액 1mL를 가하고, 볼텍스 믹서를 써서 5초간 재현탁시키고, 2-8℃에서 20분간 3000 x g 에서 원심분리한다. (침전유도액 사용시 1500 x g 로 한다.)
8. 튜브를 조심스럽게 아사ㅡ피레이션하고, 5분간 각 튜브를 카운팅한다.
- 사용상의 주의사항
1. 체외진단용으로만 사용하여야 하며, 체외진단용 이외 흡입이나 체내 투여 등을 금지한다.
2. 동 제품에 포함된 방사성동위원소 취급 시 다음 사항을 준수하여야 한다.
1)방사성동위원소는 지정된 장소에 보관하며, 관련 법령에 따라 자격을 갖춘자가 지정된 장소에서 사용한다.
2)방사성동위원소를 취급할 때 안전에 영향을 주는 불필요한 행동을 하지 않는다. (예, 음식 섭취, 흡연, 화장 등)
3)방사성동위원소를 포함한 시약을 분주해야 하는 경우, 입으로 파이펫팅 하지 않는다.
4)방사성동위원소를 취급할 때에는 장갑 및 실험복을 착용하며, 검사가 완료되면 손을 깨끗이 닦는다.
5)유출된 모든 물질은 즉시 닦아 낸 후 폐기 또는 취급에 관련된 소관 법령에 따라 처리하여야 하며, 방사성 물질의 오염이나 방사성 물질 등의 분실은 관련 법령에 정한 규정된 절차에 따라 처리한다.
3. 검사를 실시하기 전에 모든 제품(구성품 포함)은 해당 제품별 검사 온도 조건에 따라 실시한다.
4. 그 밖에 방사성동위원소의 보관, 이동, 사용 및 폐기 등 취급에 관한 사항은 관련 법규 또는 규정에 따른다.
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