BNIBT / HBeAgAb IRMA Kit
작성자 관리자
날짜 2021-10-15 14:18:46
- 사용목적
사람의 혈청이나 혈장에서 B형간염e항체(HBeAb) 또는 B형간염e항원(HBeAg)을 정성적으로 측정
- 작용원리
1. HBeAg의 측정
HBeAg IRMA키트는 샌드위치법을 이용하여 혈중의 HBeAg을 측정하는 고형상 면역방사계수측정법이다. HBeAg에 대한 다가항체가 피복된 bead가 키트에 제공 된다. 환자의 검체와 각 bead를 반응시키면 검체내의 HBeAg이 항체가 피복된 bead에 결합되고 이를 세척한 뒤 여기에 125I 를 표지시킨 단일 클론항체를 첨가시키면 이미 결합된 항원과 샌드위치 형태로 결합된다.
2. HBeAb의 측정
HBeAb IRMA키트는 검체의 Anti-HBe와 bead에 피복된 HBeAg에 대한 항체가 시약 내 일정량의 Recombinat DNA(rDNA) HBeAg에 대해 서로 경쟁적인 결합을 이용한 방법이다．재구성 DNA HBe항원이 포함된 중화시약과 함께 bead에 표지된 Anti-Hbe와 rDNA HBe에 경쟁적으로 결합한다. 검체에 항체가 많을수록 bead의 표지항체와의 rDNA결합수는 감소한다. 유리형을 제거한 뒤 125I-anti HBe를 첨가하여 반응시킨다．검체에 Anti HBe가 많을수록 rDNA와의 결합이 적어지므로 125I－anti HBe와의 결합은 감소한다. 즉 HBeAb가 많을수록 계수율은 감소한다.
- 사용방법
1. HBeAg
제 1반응
1)음성대조 200㎕(３개), 양성대조 200㎕ (2개), 검체 200㎕(1개)를 표시된 시험관에 분주한다.
2)표시된 시험관에 anti HBe가 피복된 bead를 1개씩 넣은 다음 서서히 흔들어 공기 방울을 없앤다.
3)실온에서 진동 또는 45℃에서 90분간 반응시킨다.
4)시험관 내부의 액체를 버리고 증류수로 bead를 ３-５회 세척한다. 매회 각 시험관 당 세척액 총량이 최소 ３㎖가 되게 한다. 마지막 세척 후 물기가 남지 않게 한다
제 2반응
5)모든 시험관에 125I－anti-HBe액 200㎕를 분주하고 서서히 혼합한다.
6)실온에서 진동 또는 45℃에서 90분간 반응시킨다.
7)시험관의 액체를 버리고 증류수로 bead를 ３-５회 세척하고 마지막 세척 후 가능한 한 남은 물기가 없도록 한다.
8)24시간 내에 감마선계측기로 각 시험관의 방사능을 1분간 계측한다.
2. HBeAb
제 1반응
1)음성대조 100㎕(３개), 양성대조 100㎕(2개), 검체 100㎕(1개)를 표시된 시험관에 분주한다.
2)각 시험관에 HBeAg이 포함된 중화액 100㎕를 분주한 뒤 잘 흔들어 혼합시킨다.
3)Anti-HBe 피복된 bead를 모든 시험관에 1개씩 넣고 잘 흔들어 기포를 없앤다.
4)실온(18-30℃)에서 진동 또는 45℃에서 90분간 반응시킨다.
5)액체를 버리고 증류수로 bead를 ３-５회 세척한다.
제 2반응
6)모든 시험관에 125I－anti-HBe액 200㎕를 분주하고 서서히 혼합한다.
7)실온에서 진동 또는 45℃에서 90분간 반응시킨다.
8)시험관의 액체를 버리고 증류수로 bead를 ３-５회 세척하고 마지막 세척 후 가능한 한 남은 물기가 없도록 한다.
9)24시간 내에 감마카운터로 각 시험관의 방사능을 1분간 계측한다.
- 사용상의 주의사항
1. 체외진단용으로만 사용하여야 하며, 체외진단용 이외 흡입이나 체내 투여 등을 금지한다.
2. 동 제품에 포함된 방사성동위원소 취급 시 다음 사항을 준수하여야 한다.
1)방사성동위원소는 지정된 장소에 보관하며, 관련 법령에 따라 자격을 갖춘자가 지정된 장소에서 사용한다.
2)방사성동위원소를 취급할 때 안전에 영향을 주는 불필요한 행동을 하지 않는다. (예, 음식 섭취, 흡연, 화장 등)
3)방사성동위원소를 포함한 시약을 분주해야 하는 경우, 입으로 파이펫팅 하지 않는다.
4)방사성동위원소를 취급할 때에는 장갑 및 실험복을 착용하며, 검사가 완료되면 손을 깨끗이 닦는다.
5)유출된 모든 물질은 즉시 닦아 낸 후 폐기 또는 취급에 관련된 소관 법령에 따라 처리하여야 하며, 방사성 물질의 오염이나 방사성 물질 등의 분실은 관련 법령에 정한 규정된 절차에 따라 처리한다.
3. 검사를 실시하기 전에 모든 제품(구성품 포함)은 해당 제품별 검사 온도 조건에 따라 실시한다.
4. 그 밖에 방사성동위원소의 보관, 이동, 사용 및 폐기 등 취급에 관한 사항은 관련 법규 또는 규정에 따른다.
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